1.培養(yǎng)用液pH對細胞生長有何影響？

　　由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此在配制培養(yǎng)用液時，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

　　2.何為傳代培養(yǎng)？

　　在進行傳代時，如果是懸浮細胞，只需簡單稀釋即可，若需*更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀，再懸浮于合適的培養(yǎng)液中即可。一般細胞每毫升接種數(shù)量為5´104-8´105個，傳代密度太低，細胞容易死亡，表現(xiàn)出細胞在達到增長前有較長的滯留期。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)液會由于pH下降而呈現(xiàn)黃色，表明細胞已經(jīng)達到最大密度需要換液或進行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細胞，等長滿培養(yǎng)瓶表面，即可進行傳代，多數(shù)細胞需用胰蛋白酶處理將細胞從生長物表面分離下來，以促進傳代培養(yǎng)。

　　3.細胞培養(yǎng)的環(huán)境有何要求？

　?、贌o污染環(huán)境

　　培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養(yǎng)時，與體內(nèi)相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質積累等，可導致細胞死亡。因此在進行培養(yǎng)中，保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

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