問：原代細(xì)胞和細(xì)胞系有什么區(qū)別？

答：原代細(xì)胞直接源自組織，一旦培養(yǎng)，原代細(xì)胞的壽命是有限的。原代細(xì)胞是理想的，因?yàn)樗鼈儽Ａ袅梭w內(nèi)觀察到的許多標(biāo)記。細(xì)胞系是不斷生長和復(fù)制并經(jīng)歷遺傳轉(zhuǎn)化的細(xì)胞群，具有無限的生長潛力。出于醫(yī)學(xué)和/或研究目的，細(xì)胞系已在體外維持。細(xì)胞系可以通過非常大量的傳代培養(yǎng)進(jìn)行培養(yǎng)，并且在非常高的傳代次數(shù)下可能會發(fā)生進(jìn)一步的基因型/表型變化。一般來說，細(xì)胞系缺乏體內(nèi)觀察到的許多標(biāo)記，并且也顯示出與原代細(xì)胞非常不同的標(biāo)記譜。

問：ScienCell 如何確認(rèn)細(xì)胞類型？

A. 細(xì)胞類型可以通過多種方式確認(rèn)。細(xì)胞形態(tài)學(xué)非常重要，可以幫助我們識別正確的細(xì)胞。此外，我們的質(zhì)量控制部門使用免疫熒光來確認(rèn)特定細(xì)胞類型的識別標(biāo)記的存在。免疫熒光也可用于識別污染細(xì)胞。

問：我可以獲得有關(guān)我的批次細(xì)胞的哪些捐贈者信息？

答：我們保存所有人類和動物原代細(xì)胞的記錄。如果您有特定要求（年齡和/或性別），請?jiān)谟嗁徢奥?lián)系我們的客戶服務(wù)部門。

問：我們是否對我們的細(xì)胞進(jìn)行人類白細(xì)胞抗原分型？

答：人類白細(xì)胞抗原 (HLA) 分型是一種確定一個(gè)人的組織與另一個(gè)人的組織匹配程度的方法。我們目前不在 ScienCell 研究實(shí)驗(yàn)室對此進(jìn)行測試。

問：我的原代細(xì)胞瓶是否 100% 純？

答：原代細(xì)胞永遠(yuǎn)不會是 100% 純的，但是，我們會盡力獲得盡可能純的細(xì)胞。總是存在污染細(xì)胞。

問：我需要多少經(jīng)驗(yàn)才能開始使用正常原代細(xì)胞？

答：強(qiáng)烈推薦具有在無菌條件下使用層流罩工作的經(jīng)驗(yàn)，并且具有使用其他細(xì)胞類型的經(jīng)驗(yàn)是有利的。如果您是細(xì)胞培養(yǎng)的初學(xué)者或想建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，我們可以為您提供幫助。請聯(lián)系我們的細(xì)胞培養(yǎng)專家。

問：收到后我應(yīng)該如何處理冷凍保存的細(xì)胞？

A. 收到包裹后，立即將冷凍保存的細(xì)胞從干冰運(yùn)輸容器轉(zhuǎn)移至液氮中。快速從運(yùn)輸容器轉(zhuǎn)移到液氮中，以防止細(xì)胞解凍。請勿將細(xì)胞儲存在 -20°C 或 -80°C 下，因?yàn)檫@會對細(xì)胞造成不可逆轉(zhuǎn)的損壞。

問：當(dāng)我第一次對凍存細(xì)胞進(jìn)行平板培養(yǎng)時(shí)，是否需要離心細(xì)胞以去除 DMSO？

答：我們不建議通過離心細(xì)胞來去除 DMSO 殘留物。離心過程對細(xì)胞的危害可能比 DMSO 殘留物更大，特別是如果使用不適當(dāng)?shù)母咚?。?dāng)您鋪板細(xì)胞時(shí)，DMSO 將在培養(yǎng)基中充分稀釋。例如，如果將整個(gè)冷凍管（1 毫升）細(xì)胞放入裝有 15 毫升培養(yǎng)基的 T-75 燒瓶中，則 DMSO 濃度將低于 0.67% (v/v)。如果以 5000 - 10,000 個(gè)細(xì)胞/cm2 鋪板細(xì)胞，DMSO 的濃度會更低。

問：我應(yīng)該使用什么類型的培養(yǎng)箱來培養(yǎng) ScienCell 原代細(xì)胞？

我們建議使用 37°C、5% CO ₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)來自 ScienCell 的所有原代細(xì)胞。所有 ScienCell 培養(yǎng)基都需要 5% CO ₂來維持細(xì)胞的最佳 pH 值。

問：如何用冷凍保存的細(xì)胞建立培養(yǎng)物？

A. 注意：詳細(xì)說明請參閱電池產(chǎn)品表。

1. 從液氮中取出一小瓶細(xì)胞，注意保護(hù)手和眼睛。

2. 將小瓶上的蓋子擰松 1/4 圈 10 秒，以釋放可能滯留在螺紋中的液氮，然后重新擰緊蓋子。

3. 將冷凍小瓶放入 37°C 水浴中。握住并輕輕旋轉(zhuǎn)小瓶，直至內(nèi)容物全部解凍。迅速從水浴中取出小瓶，用 70% 乙醇擦拭，然后轉(zhuǎn)移至無菌區(qū)。

4. 小心地取下蓋子，不要接觸內(nèi)螺紋。輕輕地將小瓶中的內(nèi)容物重新懸浮并分配到含有培養(yǎng)基的平衡的聚-L-賴氨酸或纖連蛋白包被的培養(yǎng)容器中（請參閱產(chǎn)品表上列出的具體說明）。

5. 蓋上培養(yǎng)容器的蓋子或蓋子，輕輕搖動容器以使細(xì)胞均勻分布。如有必要，松開蓋子以進(jìn)行氣體交換。

6. 將培養(yǎng)容器放回培養(yǎng)箱（37°C，5% CO2/95% 空氣）。

7. 為了獲得最佳結(jié)果，培養(yǎng)開始后至少 16 小時(shí)內(nèi)不要擾動培養(yǎng)。第二天刷新培養(yǎng)基以去除殘留的 DMSO 和未貼壁的細(xì)胞（除非產(chǎn)品表上另有說明）。

問：我應(yīng)該向細(xì)胞培養(yǎng)瓶中添加多少體積的培養(yǎng)基？

A. 建議在 T-25 燒瓶中添加 5 ml 培養(yǎng)基，在 T-75 燒瓶中添加 15 ml 培養(yǎng)基，在 T-150 燒瓶中添加 30 ml 培養(yǎng)基。

問：我應(yīng)該多久更換一次原代細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基？

答：請參閱您正在使用的細(xì)胞類型的產(chǎn)品表以獲取具體說明。一般來說，根據(jù)細(xì)胞的融合情況，每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基。注意：冷凍保存的細(xì)胞解凍并鋪板后，應(yīng)在約 16 小時(shí)后進(jìn)行第一次培養(yǎng)基更換，以去除 DMSO 殘留和死細(xì)胞。

問：我應(yīng)該在什么匯合處傳代細(xì)胞？

答：這取決于細(xì)胞類型。例如，內(nèi)皮細(xì)胞永遠(yuǎn)不應(yīng)該變得太匯合（90%-100%），因?yàn)檫@會促進(jìn)污染細(xì)胞的生長并導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞衰老。另一方面，成纖維細(xì)胞可以在較高的匯合度（90%-98%）下進(jìn)行傳代培養(yǎng)，并且不會受到較高匯合度的不利影響。一般來說，原代細(xì)胞不應(yīng)該變得太匯合，因?yàn)檫@會導(dǎo)致細(xì)胞衰老并促進(jìn)污染細(xì)胞的生長。

問：正常原代細(xì)胞的推薦分流比是多少？

答：ScienCell 研究實(shí)驗(yàn)室不推薦正常細(xì)胞的分流比，因?yàn)橐鹊鞍酌赶蟮募?xì)胞數(shù)量各不相同。我們建議在胰蛋白酶消化后對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并按照產(chǎn)品表上針對特定細(xì)胞類型推薦的接種密度接種細(xì)胞。

問：群體倍增和傳代次數(shù)有什么區(qū)別？

答：群體倍增是指培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)增加兩倍，最常在指數(shù)或“對數(shù)"生長階段提及。術(shù)語傳代次數(shù)是指將細(xì)胞群從培養(yǎng)容器中取出并進(jìn)行傳代培養(yǎng)（傳代）過程的次數(shù)，以保持細(xì)胞處于足夠低的密度以刺激進(jìn)一步生長。

問：我可以使用正常原代細(xì)胞進(jìn)行多少次傳代？

答：ScienCell 不使用術(shù)語“傳代"來描述增長潛力，因?yàn)槊總€(gè)客戶使用不同的分流比。ScienCell 研究實(shí)驗(yàn)室在細(xì)胞產(chǎn)品表上標(biāo)出了預(yù)期的群體倍增次數(shù)。

問：非增殖細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)嗎？

A. 非增殖細(xì)胞不能進(jìn)行傳代培養(yǎng)，因?yàn)樗鼈儾辉鲋?。這包括以下細(xì)胞類型：神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和其他一些細(xì)胞類型。產(chǎn)品表將表明細(xì)胞是否不增殖。

問：我可以重新冷凍 ScienCell 的正常原代細(xì)胞嗎？

答：我們不建議客戶重新冷凍 ScienCell 的人類和動物原代細(xì)胞。

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